圓盤(pán)擴散法是一種測定微生物抗菌藥物敏感性的標準方法。盡管它有優(yōu)勢，但使用圓盤(pán)擴散試驗作為常規抗菌藥物敏感性試驗（AST）方法的一個(gè)潛在缺點(diǎn)是它相對較慢。臨床和實(shí)驗室標準研究所（CLSI）規定，用于圓盤(pán)擴散試驗的接種物（直接菌落懸液的0.5McF標準）應在非選擇性瓊脂平板上培養18-24小時(shí)的菌落中進(jìn)行制備。使用18-24小時(shí)生長(cháng)來(lái)準備初始測試接種物的建議，在很大程度上是基于人類(lèi)工作日的規范，以及歷史上大多數臨床微生物實(shí)驗室只在“白班”期間工作的情況。因此，建立培養物或傳代培養過(guò)夜，然后在第二天進(jìn)行AST。隨著(zhù)微生物學(xué)檢測規范的變化，是時(shí)候在建立AST之前重新檢查18小時(shí)培養的需要了。減少測試準備的時(shí)間間隔將是一種相對簡(jiǎn)單和非常便宜的方法，可以更快地提供AST結果，并且可能非常適合于陽(yáng)性血培養的AST檢測，而得到結果的時(shí)間是至關(guān)重要的。

因此推薦這篇文章給大家，希望能對大家有所幫助。

Stop Waiting for Tomorrow: Disk Diffusion Performed on Early Growth Is an Accurate Method for Antimicrobial Susceptibility Testing with Reduced Turnaround Time

內容

摘要：圓盤(pán)擴散法是一種緩慢但可靠的測定微生物抗菌藥物敏感性的標準方法。我們的目標是通過(guò)減少培養物在建立圓盤(pán)擴散測試前的培養時(shí)間，來(lái)提高這種方法的周轉時(shí)間。初始方法的開(kāi)發(fā)，選擇臨床分離菌株（n=13）和質(zhì)量控制菌株（n=8）的細菌接種于血瓊脂，在35℃培養6、10或24小時(shí)，使用一組臨床適當的抗菌藥物進(jìn)行圓盤(pán)擴散測試。圓盤(pán)擴散區大小采用臨床和實(shí)驗室標準研究所（CLSI）指南進(jìn)行指導。與標準的24小時(shí)培養相比，前期的6小時(shí)生長(cháng)有1.3%的主要錯誤（MEs）和1.9%的非常嚴重的錯誤（VMEs），而10小時(shí)生長(cháng)產(chǎn)生0.7%的MEs，沒(méi)有VMEs。在6h（96.7%）和10h（96.7%）的生長(cháng)過(guò)程中，與標準培養的分類(lèi)一致性相似。從6h（r² = 0.98）和10h（r² = 0.99）生長(cháng)的抑制區大小與標準條件下的結果密切相關(guān)?；谶@些結果，作者在優(yōu)化條件下（6h生長(cháng)）進(jìn)行了圓盤(pán)擴散，使用了另外100株臨床分離株，顯示了高水平的分類(lèi)一致性（950次測量中的917次[96.5%]；95%CI，95.2-97.5%），以及沒(méi)有VMEs或MEs。與標準培養相比，使用早期生長(cháng)進(jìn)行圓盤(pán)擴散測試是一種簡(jiǎn)單而準確的敏感性測試方法，可以減少18小時(shí)，且不需要額外的供應成本或設備儀器。

結果：

分離生長(cháng)：結果顯示血瓊脂平板培養6小時(shí)缺乏增長(cháng)，主要是在第一個(gè)或兩個(gè)象限，而血瓊脂平板培養10h顯示在所有四個(gè)象限的增長(cháng)，以及大多數情況下存在單獨菌落。盡管6小時(shí)生長(cháng)有限，但6小時(shí)平板上有足夠的細菌，使0.5MCF標準懸液用于所有603個(gè)圓盤(pán)擴散試驗。

不同方法之間的分類(lèi)一致性:所有603個(gè)EDD6試驗、603個(gè)EDD10試驗和603個(gè)St24試驗均可產(chǎn)生圓盤(pán)擴散區。三分之一（366項中的122項）的臨床試驗在標準條件下對所評估的抗菌素具有耐藥性。對早期和標準生長(cháng)的AST結果進(jìn)行比較發(fā)現，603項試驗中有583項（96.7%；95%CI，94.9-97.8）在EDD6和St24之間一致，EDD10和St24之間的試驗次數（603中583項）一致（表2和3）。EDD6有1.9%的VME（95%CI，0.5-5.6%）和1.3%的ME (95% CI，0.6-2.9%）與St24相比（表2），而EDD10沒(méi)有VME和0.7%的ME（95%CI，0.2-1.9%）（表3）。EDD6的三個(gè)VME結果包括EDD6和St24對金黃色葡萄球菌的抑制有1mm的差異，EDD6和St24重復對陰溝腸桿菌的抑制有4-和6-mm的差異。

不同方法之間的定量一致性：早期圓盤(pán)擴散與標準盤(pán)擴散的比較（線(xiàn)性回歸）顯示，EDD6（r ² = 0.98）和EDD10（r ² = 0.99）與早期生長(cháng)的圓盤(pán)擴散試驗高度相關(guān)（圖2A至C）。布蘭德阿爾特曼分析（圖2D)顯示，與標準圓盤(pán)擴散（EDD - St24）相比，EDD6（平均差-0.46 mm；95% CI，-0.56至-0.35mm)和EDD10（平均差-0.42 mm；95% CI，-0.51至-0.33）的偏差相對較小。如圖3所示，早期和標準的圓盤(pán)擴散方法之間的差異是由于屎腸桿菌中EDD6的抗菌區尺寸較?。ㄆ骄?/span>-0.51 mm；95%CI，-0.81至-0.22)和金黃色葡萄球菌分離株（平均差-1.14 mm；95%CI，-1.33至-0.96)，以及EDD10的抗菌區大?。ㄆ骄?/span>-0.70 mm；95%CI，-0.90至-0.50)，糞腸桿菌（平均差-0.22 mm；95%CI，-0.40至-0.04)和金黃色葡萄球菌分離株（平均差-0.81 mm；95%CI，-0.96至-0.65)。

當通過(guò)細菌種類(lèi)評估結果時(shí)，EDD6、EDD10和St24之間的中位抗菌抑制作用的差異不超過(guò)1-mm。值得注意的是，當將EDD6或EDD10與標準圓盤(pán)擴散進(jìn)行比較時(shí)，7種細菌中有5種具有相同的中位區大?。▓D3）。與St24相比，EDD6生長(cháng)的69個(gè)AST結果中有67個(gè)（97%）與EDD10中的66個(gè)（96%）分離藥物組合的區域大小在1mm內一致。

用優(yōu)化的方法評價(jià)臨床菌株：基于這種初始方法優(yōu)化的結果，作者試圖評估100個(gè)臨床相關(guān)分離株的6小時(shí)早期圓盤(pán)擴散試驗的準確性，并使用適當的抗菌面板進(jìn)行測試。綜合結果，采用標準方法（St24）檢測的360種革蘭陽(yáng)性分離藥物組合中有38.1%耐藥，590種革蘭陰性分離藥物組合中有41.9%耐藥（St24法）。比較早期（EDD6）和標準增長(cháng)（St24）的AST結果，發(fā)現高水平的分類(lèi)一致性（950/917[965.5%]；95% CI，95.2至95.5%），以及低水平的非常重大誤差（0/306[0%]；95% CI，0至1.2%)，主要誤差（0/644[0%]；95% CI，0至0.6%)，還有一些小錯誤(950個(gè)中的33個(gè)[3.5%]；95% CI，2.5-4.8%），如圖4（抗菌區大小相對于敏感性斷點(diǎn))和表4（早期和標準生長(cháng)之間的分類(lèi)一致性）所示。

對88種分離藥物組合的區域大小進(jìn)行了比較，88種組合中85組（96.6%）EDD6與ST24平均差異之間不到2毫米，只有三個(gè)隔離藥物組合有2毫米的差異，包括氯霉素-VRE，呋喃妥因和對紅霉素-甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌（MSSA），平均差異-2、-2和2.5毫米（EDD6-St24）。

討論

更快的抗菌藥物敏感性試驗可以提供更好的臨床結果和改善抗菌藥物管理。這種對速度的需求促使了最新的發(fā)展，包括快速表型和遺傳易感性檢測，24小時(shí)微生物實(shí)驗室的人員配備，以及全實(shí)驗室自動(dòng)化。盡管有了這些進(jìn)展，仍然迫切需要一種可靠、低成本的AST方法，該方法可以比傳統方法更快地提供結果，并可以應用在具有各種資源的實(shí)驗室中。在此，作者描述了一種簡(jiǎn)單而經(jīng)濟有效的對圓盤(pán)擴散測試的修改，它有可能加快AST結果的報告。

雖然縮短早期生長(cháng)時(shí)間和標準圓盤(pán)擴散方法的檢測結果高度一致，但作者觀(guān)察到與St24相比，EDD偏?。ㄐ∮?/span>0.5 mm）。但總的來(lái)說(shuō)，EDD6和EDD10的結果與標準圓盤(pán)擴散試驗高度一致。早期的圓盤(pán)擴散測試在一系列微生物、抗生素類(lèi)別和耐藥性模式上表現良好。測試參數的多樣性可以通過(guò)生物體的選擇來(lái)證明，其中包括常規QC菌株和更具挑戰性的臨床分離株，在已建立的斷點(diǎn)附近有抑制區。

該方法也顯示了較低的技術(shù)故障率。所有來(lái)自EDD6、EDD10和St24的重復都是可評估的，沒(méi)有技術(shù)失敗?；谶@些結果（對21株分離株和適當的抗生素進(jìn)行EDD6和EDD10檢測），作者對另外100株臨床分離株進(jìn)行了圓盤(pán)擴散試驗，分別培養6小時(shí)（EDD6）進(jìn)行圓盤(pán)擴散試驗。采用優(yōu)化的方法進(jìn)行的早期圓盤(pán)擴散試驗結果沒(méi)有VME或ME，與標準24小時(shí)培養的結果分類(lèi)一致96.5%，這表明這是一種準確的抗菌藥物敏感性試驗方法，減少了周轉時(shí)間。

圓盤(pán)擴散試驗是一種簡(jiǎn)單、可靠性高的藥敏檢測方法，被廣泛認為是AST的標準方法。EDD提供了一種改進(jìn)圓盤(pán)擴散周轉實(shí)驗的方法，同時(shí)保留了這種眾所周知的方法的有益屬性。建議未來(lái)的工作旨在評估EDD納入臨床工作流程時(shí)的性能。

總之，使用早期生長(cháng)進(jìn)行圓盤(pán)擴散測試是一種簡(jiǎn)單而準確的抗菌藥物敏感性測試方法，可以減少檢測時(shí)間多達18小時(shí)，同時(shí)對檢測方法不增加額外的成本。這種方法應被納入全實(shí)驗室自動(dòng)化或常規安排第二班和第三班的實(shí)驗室所考慮。