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革蘭氏染色液
英文名稱(chēng):
貨 號 :KS0009
規 格 :5ml*5支
價(jià)格:電詢(xún)
用途:用于革蘭氏染色。(BR試劑)
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革蘭氏染色液使用說(shuō)明書(shū)
【試劑盒組成】
1. 結晶紫染色液:5ml×1 支
2. 碘液:5ml×1 支
3. 脫色液:5ml×2 支
4. 沙黃復染液:5ml×1 支
【原理】
通過(guò)結晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合 物,革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密,故遇乙醇或丙酮 脫色處理時(shí),因失水反而使網(wǎng)孔縮小,再加上它不含類(lèi)脂,故乙醇處理不會(huì )出現縫隙, 因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁 薄、外膜層類(lèi)脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差,在遇脫色劑后,以類(lèi)脂為主的外膜迅 速溶解,薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過(guò)乙醇脫色后 仍呈無(wú)色,再經(jīng)沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
【操作方法】
1. 準備好革蘭氏染色所需試劑、玻片、吸水紙、鑷子、接種環(huán)、廢液缸、洗瓶、去離 子水、酒精燈等,待檢測的菌株一般應為新鮮培養物;
2. 以酒精擦拭玻片,在酒精燈上干燥后,用接種環(huán)挑取一環(huán)滅菌的去離子水或生理鹽 水到載玻片上,挑取少量純培養物在水滴上涂抹至均勻分散,將涂片在酒精燈火焰 上滅活、固定;
3. 加結晶紫溶液 1-2 滴,染色 1 分鐘,用去離子水輕輕從培養物上方流過(guò)水洗; 4. 待干,加革蘭氏碘液,作用 1 分鐘,用去離子水輕輕從培養物上方流過(guò)水洗;
5. 加脫色液(95%酒精),不時(shí)搖動(dòng)玻片,直至無(wú)紫色脫落為止(約 10-20 秒),用去 離子水輕輕從培養物上方流過(guò)水洗;
6. 待干,加復染液,復染 30 秒。用去離子水輕輕從培養物上方流過(guò)水洗,待玻片干 燥后鏡檢;
7. 油鏡鏡檢。菌體呈紫色者為革蘭氏陽(yáng)性菌;呈紅色者為革蘭氏陰性菌。
【注意事項】
1. 培養物要新鮮,以免對結果的判斷造成影響;
2. 酒精洗脫為關(guān)鍵步驟,不可長(cháng)時(shí)間洗脫,以免對結果判斷造成影響; 3. 碘液容易揮發(fā),平時(shí)應擰緊瓶蓋、避光保存;
4. 涂片可采用自然風(fēng)干、干燥箱等方法進(jìn)行干燥;
5. 每一步水洗時(shí),注意不要直接對著(zhù)涂片沖洗,水流應從上方流經(jīng)涂片,輕輕水洗。