革蘭氏陽(yáng)性食源性致病菌--單核增生李斯特菌是世界范圍內一個(gè)重要的公共衛生和食品安全問(wèn)題。孕婦、嬰兒、老年人和免疫抑制個(gè)體感染這種致病菌可導致嚴重的疾病和相對較高的死亡率。感染途徑與奶酪、肉類(lèi)、牛奶、蔬菜和魚(yú)等食物有關(guān)。因此，從各種食品中分離單核增生李斯特菌的有效方法對保證食品的質(zhì)量和安全具有重要意義。

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      Development of a Novel Selective and Differential Medium for the Isolation of Listeria monocytogenes

內容

摘要

認識到目前使用的選擇性培養基局限性，作者希望在保持成本效益的同時(shí)，開(kāi)發(fā)一種能提高特異性的替代培養基。本研究的目的是開(kāi)發(fā)一種新的選擇性和特異性培養基來(lái)檢測單核增生李斯特菌(含卵磷脂和左氧氟沙星培養基-LL培養基)。通過(guò)分別采用純培養物和食品樣品進(jìn)行試驗，并與常規MOX培養基和兩種顯色培養基比較其特異性和靈敏度。

結果與討論

試驗細菌在含有不同濃度左氧氟沙星的基礎培養基上的生長(cháng)

為了確定抗生素的最佳濃度，作者測試了細菌在含有四種不同濃度左氧氟沙星的基礎培養基上的生長(cháng)情況。在制備的基礎培養基中添加左氧氟沙星（濃度為：0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L、0.25mg/L）。

單核細胞增生李斯特菌在MOX培養基和LL培養基上回收情況

LL培養基上的細菌計數與MOX培養基上的細菌計數差異無(wú)統計學(xué)意義(P > 0.05)。在MOX和LL培養基上，培養24小時(shí)后菌落并不總是具有典型外觀(guān)。在48小時(shí)，所有單核細胞增生李斯特菌菌株在這些培養基上形成正確的形態(tài)(分別為黑色帶黑色暈圈和白色帶暈圈)。

LL培養基的性能評價(jià)

所有測試的單核細胞增生李斯特菌菌株在每種測試培養基上產(chǎn)生典型的單核細胞增生李斯特菌菌落。.Brillience李斯特瓊脂和LL培養基的排他性最好。

使用加標和未加標食物樣本評估LL培養基的特異性和敏感性

Table 3 介紹了未加標食物樣本的細菌學(xué)分析結果。陰性樣本的數量等于食物樣本總數，Brilliance李斯特瓊脂、李斯特菌顯色培養基和LL培養基的特異性分別為96.5%、94.5%和96.0%。除MOX培養基外，LL培養基和兩種顯色特異性無(wú)顯著(zhù)差異

Table 4表示，在50份加標食品樣品中，李斯特顯色培養基和LL培養基的靈敏度最高，其次是Brilliance李斯特菌(92.0%)和MOX(54.0%)。

討論

美國FDA推薦的從食品中分離單核細胞增生李斯特菌的方法，樣品在李斯特增菌緩沖肉湯中進(jìn)行選擇性前增菌培養，然后在選擇性和差異培養基(如PALCAM、Ox- ford、MOX和李斯特顯色培養基)上進(jìn)行平板培養。但是，檢測李斯特菌屬利用的七葉皂苷酶活性（如：PALCAM、牛津瓊脂和MOX），無(wú)法區分單核細胞增生李斯特菌與其他李斯特菌屬。此外，幾種使用有色化合物的顯色介質(zhì)，如5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡萄糖苷和L-α-磷脂酰肌醇，價(jià)格昂貴。使用顯色培養基檢測單核細胞增生李斯特菌通常涉及由李斯特菌屬產(chǎn)生的β-D-葡萄糖苷酶裂解底物5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡萄糖苷，結合L-α-磷脂酰肌醇用于檢測磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C (PI-PLC)和磷脂酰膽堿特異性磷脂酶C (PC-PLC)。

Oxoid chromogenic Listeria agar (OCLA)含有大豆卵磷脂而不是磷脂酰肌醇，用于區分單核細胞增生李斯特菌與其他李斯特菌屬。結果表明，大豆卵磷脂是磷脂酰肌醇的合適替代品。大豆卵磷脂是一種廉價(jià)且易得的產(chǎn)品，可用于檢測PI-PLC和PC-PLC的活性。本研究中，LL培養基含有大豆卵磷脂，用于區分單核細胞增生李斯特菌與其他李斯特菌。LL培養基具有更高的特異性和敏感性。與選擇性培養基比較，更好的區分單增李斯特菌與伊氏李斯特、英諾克李斯特。與顯色培養基比較，除價(jià)格優(yōu)勢外，LL培養基還能抑制PI-PLC和PC-PLC陽(yáng)性細菌如蠟樣芽胞桿菌和葡萄球菌的生長(cháng)。

綜合以上數據可知，本研究中的LL培養基比MOX具有更高的特異性和敏感性。尤其，LL可輕松區分單核細胞增生性李斯特菌、伊氏李斯特和英諾克李斯特，后者在常規PALCAM、牛津瓊脂和MOX上經(jīng)常產(chǎn)生假陽(yáng)性結果。此外，LL培養基對Brilliance瓊脂和科瑪嘉表現出相似的特異性和敏感性，且成本降低。LL培養基還能抑制PI-PLC和PC-PLC陽(yáng)性細菌如蠟樣芽胞桿菌和葡萄球菌的生長(cháng)，這些菌在一些顯色培養基上引起假陽(yáng)性。由于LL培養基的良好特異性，可減少對菌落進(jìn)行一步確認試驗的工作和時(shí)間。LL培養基的成本效益將使其適合常規實(shí)驗室使用。雖然需要進(jìn)一步的研究來(lái)評估更多李斯特菌在LL培養基上的生長(cháng)情況，但LL培養基可能為食品中單核增生李斯特菌的檢測提供了一種有價(jià)值的選擇性培養基。